干貨丨標準曲線經典十問十答，助您搞定標準曲線！

     近實驗很糟心，標準曲線弄不清。一條要拉幾個點、濃度范圍怎么選。線性需要幾個九、期間核查有沒有……

     的確，大家在標準曲線的制作過程中會有很多的問題，今天小編就帶大家全面的了解標準曲線的制作規則。一起來看看吧！

01

Q:什么是校準曲線？

A:標準曲線就是我們平常大家操作得多的，把標準品稀釋成不同的濃度點，直接上機測試，繪制曲線用于定量。但是如果樣品經過復雜的前處理，比如消解，萃取或者凈化等過程，那么目標化合物就會有一定的損耗，用標準曲線來定量是不準確的，我們就可以用工作曲線。工作曲線就是所使用的標準物質溶液經過與樣品相同的前處理，這樣就可以盡量減少前處理帶來的計算誤差了。

02

Q:標準曲線要做幾個點？

A:標準曲線需要幾個數據點，與所檢測組分的濃度范圍、檢測信號響應類型、儀器的靈敏度和分辨率都有關。

對于一些低濃度，特別是痕量分析，比如二噁英、多氯聯苯等等，有些樣品的含量在ppb級別，且濃度范圍不是很大，檢測器響應可靠，背景干擾非常小的，可以選用較少的工作點，有的選三個濃度點就可以了，有的甚至可以只用一個濃度點，另一個點直接用坐標原點。

但是對于一些樣品濃度范圍較寬的，比如頂空法測一些樣品中的苯系物的項目，樣品的濃度范圍變化很大，所以標曲的濃度范圍設置很寬，但是檢測器的響應與濃度的關系不是一條直線，也就是說不是一次方程，這時可以采用分段校準的方式。有的項目比如說GPC測分子量分布的，由于受到色譜柱工藝等條件的限制，很難做到線性，經常用三次方程擬合，如果擬合的曲線達不到三個九也會做五次方程的擬合。這幾種情況下就需要根據需要多做幾個數據點。

當然在各項擬合指標合格的情況下，采用一次方程更符合統計學上參數少的統計簡潔性原則。

補充：如果是分段校正，則每段需要至少兩個數據點。而對于一些樣品無濃度范圍規律的，特別是一些檢測機構，如果分析儀的檢測響應可靠，環境因素影響少的，可以做校正曲線。若是環境因素影響大的，則不必做校正曲線，而采用標準加入法反而簡便一些，比如陽極溶出伏安法測樣品濃度。

03

Q:標準曲線為什么常見的是奇數個點？

A:其實標準曲線做幾個點，點分布如何，影響的是測試結果的不確定度。

好的測量應該是不確定度小的，這在判斷樣品的結果是否超標或是否符合限值的時候至關重要。

我們在推算樣品的不確定度時，有兩個結論：一、標曲的重心點處，所查出來的樣品不確定度小。二、標曲的點數越多，樣品的不確定度越小。所以在樣品濃度的附近應盡量多的分布標準點。奇數點的設置就是先通過已知信息來確定濃度范圍，在該濃度范圍內先確定中間點，然后在中間點左右分布對稱的標準點，所以做出來的標曲常常是奇數個點。

04

Q:標準曲線濃度點如何設置？

A:對于我們分析實驗室的一些常規理化性質的測試，一般標準曲線的第yi個點是檢出限的5~10倍。以后根據一倍遞增，gao濃度是低濃度的10~20倍為宜。對于濃度范圍寬的曲線，遞增的倍數會更大，比如三倍，五倍等。這個也是要根據儀器的靈敏度來調整的。

05

Q:一元標準曲線方程各參數是什么意思？

A:一元標準曲線方程y=a+bx，r² 。 其中x表示化合物濃度，y表示化合物在儀器上的響應，a表示在y軸上的截距，b表示曲線的斜率，1/b 表示化合物的響應因子。響應因子可以簡單快速的判斷化合物配制的準確性和儀器的穩定性，比如氘燈的能量是否正常。r表示x與y的相關系數：r越接近于1，正向相關性越好，r越接近于-1，負向相關性越好，r越接近于0，相關性越差。r² 表示判定系數，是一個統計學概念，當根據試驗數據進行曲線擬合時，試驗數據與擬合函數之間的吻合程度，用一個與相關系數有關的一個量r²來評價：r²值越接近1，吻合程度越高，越接近0，則吻合程度越低。

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Q:標準曲線r²值需要幾個9才合格？

A:實驗室應按檢測標準（方法）的要求使用標準溶液或標準物質建立標準曲線。所用標準溶液或標準物質應覆蓋被測樣品的濃度范圍。檢測標準（方法）如無具體的要求，至少使用5個標樣（除空白外）建立線性標準曲線，每個點重復測定1-3次，對于篩選方法，線性回歸方程的相關系數不應低于0.98，對于確證方法，相關系數不應低于0.99。

其實，大于0.99是判斷是否為線性相關的一個標準，實際應用中線性大于0.999才是比較理想的。線性在0.99到0.999之間的監測結果只用接近gao濃度一半（中間濃度）的位置才比較準確，如果線性大于0.999的話，在整個線性范圍內都會有一個比較滿意的結果。

如果檢測的線性不好，可以減少標準的覆蓋范圍，將標準的濃度調整到待測樣品濃度附近，這樣結果也是非常準確的。例如，樣品的濃度約20ppb，但在0~50ppb范圍建立標準曲線，但線性非常不理想，這時可以將標準范圍調整到15~25ppb之間，作五個標準。

07

Q:相關系數的有效數字？

A:GB5750.3-2006 8.2.7項有如下規定：校準曲線相關系數只舍不入，保留到小數點后出現非9的一位，如0.99989→0.9998。如果小數點后都是9時，多保留小數點后4位。

08

Q:標準曲線有效期有什么規定？

A:我們做好了一次曲線，我們還要保證以后每一次曲線，每一次定量都是準確的，這樣就要做標準物質的期間核查。

（1）標準曲線屬于實驗室質量控制的范圍，按照《實驗室資質認定評審準則》中結果控制的要求：定期使用有證標準物質（參考物質）進行監控和/或使用次級標準物質（參考物質）開展內部質量控制。

（2）準則中并未對“定期”進行規定，所以如果“定期”，就根據實驗室的實際情況來定了。

（3）既然準則上沒說明，那根據一般的分析教材，當實驗條件（包括藥劑、人員、儀器等）發生變化時，hao重新制作標準曲線。

09

Q:標準曲線能不能長期使用？

A:這就涉及到儀器的期間核查，要用標準曲線的質控點進行核查。每批樣品應測定一個校準曲線中間點濃度的標準液，其測定濃度與校準曲線標準點的濃度相對誤差不得超過規定范圍，如果超過規定相對誤差，需重新繪制校準曲線。

也可以這樣說，不同的分析項目，不同的分析方法，校準曲線斜率的穩定性不同。如校準曲線的斜率較為穩定，則在樣品分析時，可只測定兩個標準點，當此兩個標準點與原曲線相應點的相對偏差均小于5%時，可使用原校準曲線。因此，樣品分析前，需根據斜率的穩定性來確定是否需同時制作校準曲線。

我們一般的做法是，根據檢測的頻率來做，如果該項目天天都要檢測，并且檢測量較多時，要求至少每周做一次曲線。如果檢測量上，一個月都沒有幾單的話，就一個月做一次曲線。當然，儀器如果出現故障并大修后回來的，經過檢定后，需要重新做曲線。

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Q:標準曲線是否必須過原點？

A:標準曲線不一定非要過原點，只要線性好就可以了。因為做空白的話基本上不會過原點。過原點是強制過的，實際曲線可能不過，就會造成誤差。不過原點是因為有系統誤差。

針對是否過原點(0，0)問題，可以從原點(0，0)代表的意義來考慮：

即所測組分濃度為零的時候，信號響應值（液相色譜也就是峰高或者峰面積）是否也為零。通常來說色譜分析是屬于這種情況的，因而可以把（0，0）點作為一個濃度水平計入標準曲線（甚至不需要真的去配一個濃度為零的標準溶液來進樣），這也是單點法定量的一個依據；而類似的情況在光譜法測定時就講不通了，濃度為零的標準溶液（本底）響應信號（吸光度）往往不是零，這個時候標準曲線就不一定過原點了。

總結

了解各個分析項目校準曲線斜率的穩定性及影響穩定性的主要因素，可決定是否能采用質控點檢驗原校準曲線，省略重新制作校準曲線；從校準曲線斜率的變化，可判斷標準溶液的穩定性，從而確定其標定周期；分析低濃度樣品時，應使用高純度的水和試劑，以減少空白值，降低樣品的分析誤差。

科學地運用校準曲線，對于降低分析成本、提高檢測質量有著重要的意義。